細胞計數是細胞培養過程中的重要步驟，“傳統的細胞計數方法"是在顯微鏡下使用血細胞計數板人工計數。這里博大博聚為大家介紹下傳統細胞計數的詳細的步驟，供大家參考。

1、準備(bei)好血細(xi)胞(bao)計數板

1)     先用無水乙醇清潔血細胞計數板表面和蓋玻片；

2)     再用純水清潔血細胞計數板表面和蓋玻片；

3)     每次清洗后用洗耳球吹干。

4)     在血細胞計數板的計數池上方蓋上專用的蓋玻片。

注意：最好不要(yao)擦拭血細(xi)胞計(ji)數(shu)板(ban)的計(ji)數(shu)池，防止標(biao)識線損壞。

2、制備細胞懸液

1)     貼壁生長的細胞，使用胰(yi)酶(mei)消化的方(fang)法使細胞從培養(yang)瓶表(biao)面脫落(luo)；

2)     漩渦混勻或使用移液器反復吹吸細胞懸液，盡量減少細胞團簇；

3)     懸浮(fu)細胞則可以直(zhi)接(jie)進行(xing)取樣計數；

4)     細胞懸液濃度控制在1×10⁶個細胞/mL左右。

注意：

a)      盡量少、盡量小的細胞團簇；

b)     如需計算活率，則需將細胞懸液按照1：1的比例加入等量的0.4%的臺盼藍染料，混勻后，靜置1~2分鐘。    

3、細胞加(jia)樣(yang)

1)     移液器輕吹細胞懸液使其混合均勻；

2)     將細胞懸液與臺盼藍染料按1:1體積混合均勻；

3)     取出10uL細胞懸液，將細胞懸液滴加于血細胞計數板邊緣凹槽處，此時液滴將在虹吸的作用下進入蓋玻片下方的計數池。

注意(yi)：                                              

1)     每次加樣前要混勻細胞懸液，防止細胞沉降造成取樣誤差增大；

2)     加樣過程中，要一次性將細胞懸液注入計數室，防止氣泡產生，否則要重做；

3)     加樣時不要將細胞懸液直接吹入計數池，會造成細胞分布不均勻。

4、 人工(gong)細胞計數

計(ji)數(shu)工具(ju)：10X物鏡的(de)顯微(wei)鏡、血細胞計(ji)數(shu)板。

1)     加樣后，將血細胞計數板靜置數分鐘；

2)     把血細胞計數板放置在顯微鏡的載物臺進行觀察-計數-記錄；

3)     分別計數大方格1-2-3-4中的細胞總數。

注意：

1)     計數時建議重復1-2次，取平均值，減小計數誤差；

2)     四個區域的細胞數量偏差不應超過 5%，否則要重新加樣。

3)     對橫跨刻度上的細胞，依照“數上不數下，數左不數右"的原則進行計數。

4)    為降低細胞計數誤差，濃度最好控制在1×10⁶個細胞/mL左右；

5)     計數時，只計數完整的細胞，如有聚團細胞則按一個細胞進行計數。

5、 血細胞(bao)計數(shu)板濃度(du)計數(shu)標(biao)準

（中國的標準：JJG 552-1988血細胞計數板(ban)試行檢定規程）

1)     如上圖所示，當血細胞計數板放上蓋玻片后，平臺與蓋玻片之間的距離 (即高度)為 0.1mm；

2)     平臺中心部分各以3mm長，3mm寬精確劃分為9個大方格，稱為計數室，每個大方格面積為1mm²，體積為 0.1mm³；

3)     細胞濃度 (mL)=(四個大方格細胞數之和)/4X2（染液稀釋倍數）X 10⁴⁼？個細胞/mL。

注意：如果不加入(ru)臺盼藍染料，則(ze)無需乘以(yi)2。

相信有些(xie)小伙(huo)伴，即使(shi)花費(fei)很(hen)長時間熟悉，并實際接觸(chu)細(xi)胞計(ji)數操作的(de)全部流(liu)程后，還是會有結果(guo)不滿意、人(ren)工操作效(xiao)率低、結果(guo)無法一目了然、細(xi)胞計(ji)數數到“眼(yan)疼"的(de)情(qing)況。

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7、血細胞計數(shu)板上機實拍圖案例

8、細(xi)胞計數結果包括(kuo)

總細胞濃(nong)度(du)、活/死(si)細胞濃(nong)度(du)、活/死(si)細胞比(bi)率、總細胞聚團(tuan)(tuan)率/濃(nong)度(du)、活細胞聚團(tuan)(tuan)率/濃(nong)度(du)、死(si)細胞聚團(tuan)(tuan)率/濃(nong)度(du)等計數結果、原始圖片、識(shi)別圖片、柱狀(zhuang)圖、散(san)點圖、等高線圖、報(bao)告單(dan)等…

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